Lo splicing è il meccanismo che, eliminando le parti non codificanti del DNA, porta alla produzione dell’RNA messaggero (mRNA) destinato alla sintesi della proteina. In particolare i ricercatori hanno verificato che la kinetina corregge lo splicing e quindi aumenta i livelli di mRNA della proteina CFTR normalmente funzionante, anche in cellule epiteliali ottenute da brushing (spazzolamento) nasale e in cellule ematiche da linee linfoblastoidi di pazienti FC. In parallelo, sono state individuate, attraverso un’analisi di una libreria virtuale che raccoglie le strutture chimiche di migliaia di composti, alcune nuove molecole simili alla kinetina, che sono state studiate mediante saggi in vitro. In particolare, i ricercatori hanno esaminato l’efficacia di 8 composti simili alla kinetina; fra questi il migliore è risultato essere RECTAS, che ha una efficacia paragonabile alla kinetina a un dosaggio 10 volte inferiore. Infine, è stato studiato l’effetto della kinetina sull’insieme delle molecole di mRNA prodotte dalla cellula (quindi tutti gli RNA messaggeri che veicolano i diversi codici genetici per la sintesi di tutte le proteine di una cellula), con lo scopo di valutare possibili effetti indesiderati su altri geni e cercare di comprendere il meccanismo di azione del farmaco.
The ability of kinetin to correct the splicing of CFTR in vitro was verified, and the effect of kinetin on CFTR splicing in cultured epithelial cells from nasal brushing of 3 CF patients and in 3 lymphoblastoid lines has been tested and confirmed; in particular, researchers verified that the treatment is capable of increasing wild-type mRNA. Moreover, they tested the efficacy of 8 additional compounds among which RECTAS proved to be the best, being active at a concentration ∼10 fold lower than kinetin, confirming that kinetin impacts on the expression of a limited number of genes. Other results of the projects include producing a dual-fluorescence reporter vector for the validation of lead compounds and confirming that the mechanism of action of kinetin on CFTR splicing does not depend on specific in-cis sequence elements reported for other genes and may be mediated by the level of the splicing regulatory protein hnRNPA2B1.
