Esperimenti ex vivo sono stati condotti per valutare la modifica del complesso di proteine della cellula (proteoma) in risposta a trattamento con VX-770. La procedura ex vivo riguarda cellule prelevate dal paziente, trasferite in laboratorio e sottoposte a test di vario genere. In questo progetto sono stati isolati i leucociti (globuli bianchi) da sangue periferico di pazienti FC portatori di diverse mutazioni (di classe III e IV con difetto di gating e non gating con funzione residua di CFTR).
Le cellule sono state poi trattate con VX-770 (ivacaftor) e in seguito sottoposte ad analisi del proteoma, utilizzando avanzate tecniche di laboratorio (spettrometria di massa, nano Cromatografia LC e il saggio la GST-HS-YFP che valuta il funzionamento di CFTR per mezzo della proteina HS-YFP che diventa fluorescente se nella cellula funziona il trasporto dello iodio e quindi del cloro). In aggiunta, i ricercatori hanno utilizzato strumenti bioinformatici per valutare le interazioni tra proteine e identificare eventuali vie metaboliche (pathway) alterate. I ricercatori hanno isolato 1.545 proteine e hanno concentrato la loro attenzione su quelle identificate in quelle cellule nelle quali è stata ripristinata l’attività di CFTR grazie alla somministrazione VX-770. Queste analisi hanno permesso di identificare due pathway, coinvolti nella migrazione leucocitaria e nel mantenimento della struttura cellulare, che sono risultati modificati nelle cellule che hanno risposto al trattamento con VX-770. Studi approfonditi potrebbero portare a identificare dei biomarcatori informativi circa l’efficacia dei trattamenti farmacologici disponibili.
Ex-vivo experiments on leukocytes were conducted to evaluate the modification of the proteome in response to the treatment with VX-770. In this project, leukocytes were isolated from peripheral blood of CF patients carrying different mutations (class III and IV with gating and non-gating defect with residual CFTR function).
The cells were then treated with VX-770 (ivacaftor) and subsequently, their proteome has been analysed using laboratory techniques such as high-resolution mass spectrometry nano-LC chromatography and GST-HS-YFP assay. In addition, the researchers used bioinformatics tools to evaluate the interactions among proteins and identify possible altered pathways. The researchers isolated 1545 proteins and investigated those proteins of the cells in which the activity of CFTR was restored after VX-770 treatment. The data obtained allowed the identification of two pathways, involved in the leukocyte transendothelial migration and maintenance of cellular structure, which were found to be altered in the cells that responded to treatment with VX-770. Further studies could lead to the identification of biomarkers useful for the evaluation or prediction of the efficacy of new therapies.
