Il nuovo test è chiamato HS-YFP perché basato sulla proteina HS-YFP (Halide Sensitive Yellow Fluorescence Protein), che diventa fluorescente se nella cellula funziona il trasporto dello iodio (e quindi del cloro). È stato sperimentato in modelli cellulari dotati di proteina CFTR normale e CFTR inattivata. Ha mostrato di distinguere il funzionamento normale di CFTR da quello difettoso. Questi risultati sono stati confermati su monociti derivati da prelievo di sangue in soggetti sani e soggetti con FC. Sono stati sottoposti al test i monociti di un paziente con le mutazioni G1349D/F508del in trattamento con Ivacaftor, di 18 pazienti con mutazioni stop in trattamento con farmaco PTC, di 7 in trattamento con Orkambi, di 4 in trial con Ivacaftor + nuovo correttore VX-661. Sono stati anche studiati 14 pazienti omozigoti per la mutazione S1251N in trattamento con Ivacaftor. Alcune variabili del test necessitano ancora di ottimizzazione. I risultati ottenuti orientano comunque a ritenere che HS-YFP possa rappresentare un test in grado di valutare il funzionamento di CFTR e gli effetti dei nuovi farmaci su CFTR difettosa, su materiale di facile accessibilità (monociti da prelievo venoso).
The specificity of the assay for CFTR activity is tested using two different CFTR inhibitors, CFTR-172 and PPQ-102, and downregulating CFTR (siRNA technology) in the acute monocytic leukaemia MM6 cell line, highly expressing CFTR. The outcome was confirmed also in peripheral blood leukocytes collected by venipuncture (3-5 mL), performed in different centers and by different operators. Significant differences between WT and CF peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and purified monocytes were recorded. Of special interest were the results obtained by the HS-YFP assay performed in PBMCs of a patient carrying the G1349D/F508del mutation and taking Ivacaftor; and the results in 18 patients in a PTC clinical trial, in 7 patients taking Orkambi, in 4 patients in clinical trial with VX 770+VX 661. 14 CF patients homozygotes for S1251N mutation and treated with ivacaftor were studied (by Rotterdam researchers) and HS-YFP assay seemed to confirm the positive effect of ivacaftor. Even if several assay variables that need further optimization among partners of research project were identified, HS-YFP assay might represent a new convenient method to measure CFTR function and the effect of correctors and potentiators on defective CFTR function. It represents a further step toward a personalized medicine approach in CF.
