Malgrado siano disponibili test sofisticati per identificare le mutazioni responsabili di FC mediante analisi del DNA, in circa il 5% di pazienti FC non è possibile ottenere una diagnosi molecolare completa. Alcune delle mutazioni che causano FC infatti sono presenti in regioni del gene che non sono normalmente analizzate, in quanto sarebbe troppo lunga e costosa tale analisi con le tecnologie attualmente impiegate. Per scoprire le mutazioni ancora non identificate (in particolare le mutazioni “splicing”) e per evidenziare alterazioni nel livello di funzionamento del gene è importante analizzare l’ RNA messaggero (RNAm) che è la molecola attraverso cui il DNA del gene trasferisce l’informazione necessaria per la sintesi della proteina. L’RNAm del gene CFTR può essere analizzato su cellule di epitelio nasale (prelevate attraverso “brushing”). Questo progetto si prefigge di analizzare l’RNAm del gene CFTR in un gruppo selezionato di pazienti nei quali non sia stato possibile identificare le mutazioni responsabili della malattia. Nei casi in cui quest’analisi non fosse risolutiva si procederà al sequenziamento ultramassivo (con tecnica di NGS o Next Generation Sequencing) dell’intero gene. Oltre a pazienti FC verranno anche studiati soggetti che hanno una malattia del tutto simile alla FC ma senza presentarne la caratteristica diagnostica fondamentale (positività del test del sudore).
This project is aimed to:
1. widen the mutational spectrum of CF by identifying novel mutations escaping routine screening by a qualitative and quantitative analysis of CFTR mRNA in nasal epithelial cells;
2. search for novel mutations in selected patients by next generation sequencing (NGS) on the CFTR locus;
3. define the pathogenic role of newly identified mutations by studying their effect on CFTR mRNA;
4. analyze in a comprehensive way the effect of mutations leading to PTCs on CFTR mRNA stability.
